進口熒光顯微鏡是以紫外線為光源,用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。
進口熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學物質(zhì)的分布及定位等。
進口熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別:1.照明方式通常為落射式,即光源通過物鏡投射于樣品上;2.光源為紫外光,波長較短,分辨力高于普通顯微鏡;3.有兩個特殊的濾光片,光源前的用以濾除可見光,目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線,用以保護人目。
進口熒光顯微鏡標本制作要求
(一)載玻片載玻片厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間,太厚的坡片,一方面光吸收多,另一方面不能使激發(fā)光在標本上聚集。載玻片必須光潔,厚度均勻,無明顯自發(fā)熒光。有時需用石英玻璃載玻片。
?。ǘ┥w玻片蓋玻片厚度在0.17mm左右,光潔。為了加強激發(fā)光,也可用干涉蓋玻片,這是一種特制的表面鍍有若干層對不同波長的光起不同干涉作用的物質(zhì)(如氟化鎂)的蓋玻片,它可以使熒光順利通過,而反射激發(fā)光,這種反射的激發(fā)光女可激發(fā)標本。
?。ㄈ吮窘M織切片或其他標本不能太厚,如太厚激發(fā)光大部分消耗在標本下部,而物鏡直接觀察到的上部不充分激發(fā)。另外,細胞重迭或雜質(zhì)掩蓋,影響判定。
?。ㄋ模┓怦褎┓怦褎┏S酶视?,必須無自發(fā)熒光,無色透明,熒光的亮度在pH8.5~9.5時較亮,不易很快褪往。所以,常用甘油和0.5mol/lpH9.0~9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液作封裱劑。
(五)鏡油一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標本時,必須使用鏡油,使用特制的無熒光鏡油,也可用上述甘油代替,液體石蠟也可用,只是折光率較低,對圖像質(zhì)量略有影響。